نشاسته سیبزمینی[89]
فرمول شیمیایی: (C6H10O5)n
وزن ملکولی: n14/162
نشاسته سیبزمینی دارای کمتر از 200 میلیگرم در گرم رطوبت داشته و pHآن 6- 8 میباشد.
بهصورت خشک در درجه حرارت معمولی اتاق قابل نگهداري ميباشد.
نشاسته برنج[90]
بهصورت خشک در درجه حرارت معمولی اتاق قابل نگهداري ميباشد.
پودر گوجهفرنگي
پودر قرمز رنگ قابل حل در آب كه حاوي 25% نشاسته ذرت ميباشد. 100 گرم پودر معادل 1 كيلوگرم گوجه فرنگي تازه ميباشد و ماده خشك آن 75% ميباشد. با غلظت 10- 5 گرم در ليتر ميبايست بهكار برده شود.
عصاره مخمر[91]
یک مخمر خشک است که دارای محتوای آمینو نیتروژنی و ویتامینهای ب- کمپلکس محلول در آب میباشد و بهدلیل محتوای پایین کلرید سدیم، جهت کشت بافت گیاهی بسیار مناسب میباشد و نیتروزن کل آن حدود 8/9، آمینو نیتروژن حدود 1/5، کلرید سدیم حدود 3/0 و pH محلول 1 درصد آن، 7 میباشد.
بهصورت خشک در درجه حرارت معمولی اتاق قابل نگهداري ميباشد.
قابل حل در آب ميباشد.
آگار YPD[92]
در هر لیتر آگار YPD، 20 گرم دکستروز (گلوکز)، 20 گرم پپتون، 10 گرم عصاره مخمر و 10 گرم آگار تست شده میکروبیولوژی وجود دارد.
بهصورت خشک در درجه حرارت معمولی اتاق قابل نگهداري ميباشد.
60 گرم از آن را در 1 لیتر آب مقطر حل نموده و pH روی 2/7 تنظیم شود.
ضدعفونی توسط اتوکلاو در درجه حرارت 121 درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه صورت میگیرد.
آگار YT[93]
در هر لیتر آگار YT، 5 گرم کلرید سدیم، 8 گرم تریپتون، 5 گرم عصاره مخمر و 10 گرم آگار تست شده میکروبیولوژی وجود دارد.
بهصورت خشک در درجه حرارت معمولی اتاق قابل نگهداري ميباشد.
27 گرم از آن در 1 لیتر آب مقطر حل شود.
ضدعفونی توسط اتوکلاو در درجه حرارت 121 درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه صورت میگیرد.
YPD Broth
در هر لیتر آگارYPD Broth، 20 گرم دکستروز (گلوکز)، 20 گرم پپتون، 10 گرم عصاره مخمر وجود دارد که 50 گرم از آن جهت تهیه 1 لیتر از محلول نهایی بهکار میرود.
بهصورت خشک در درجه حرارت معمولی اتاق قابل نگهداري ميباشد.
50 گرم از آن را در 1 لیتر آب مقطر حل نموده و pH روی 2/7 تنظیم گردد.
.ضدعفونی توسط اتوکلاو در درجه حرارت 121 درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه صورت میگیرد.
YPDG Broth
در هر لیتر آگار YPDG Broth ، 1 گرم دکستروز (گلوکز)، 20 گرم پپتون، 10 گرم عصاره مخمر وجود دارد.
بهصورت خشک در درجه حرارت معمولی اتاق قابل نگهداري ميباشد.
31 گرم از آن را در 1 لیتر آب مقطر حل نموده و 30 میلیلیتر گلیسرول اضافه شود.
.ضدعفونی توسط اتوکلاو در درجه حرارت 121 درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه صورت میگیرد.
YT Broth
در هر لیتر Broth YT، 5 گرم کلرید سدیم، 8 گرم تریپتون، 5 گرم عصاره مخمر وجود دارد.
بهصورت خشک در درجه حرارت معمولی اتاق قابل نگهداري ميباشد.
18 گرم از آن در 1 لیتر آب مقطر حل شود.
ضدعفونی توسط اتوکلاو در درجه حرارت 121 درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه صورت میگیرد.
در نهايت بايستس توجه داشت كه وقتي نمونه هاي مورد كشت در محيط هاي مختلفي كه از لحاظ خصوصيات فيزيكي با يكديگر متفاوت هستند قرار ميگيرند، رفتار هاي مشابهي را بروز نميدهند و درنتيجه در انها اختلافات مورفولوژيكي مشاهده ميگردد. بطور مثال وايت و اسكوگ در كشت تنباكو مشاهده نمودند كه درمحيط محلول مقدار بيشتري ساقه، نسبت به محيط كشت اگار تشكيل ميگردد. در بعضي از منابع اورده شده است كه در كل براي تشكيل جنين رويشي و ايجاد شاخ و برگ شرايط نسبتا بيهوازي مناسب تر بوده و انرا تسريع ميكند؛ در حاليكه در شرايطي كه محيط كشت داراي تهويه بهتري است، تشكيل ريشه تسريع ميشود(Staba, 1980) . ازمايشات ديگر نيز مشخص نموده كه میزان هوادهی و مقدار و غلظت اکسیژن محلول در محیط کشت بر روی کشت در حال رشد در بیوراکتور ها اثر می گذارد(Tatic et al. 1991 , Kim et al., 1991b) . مثلا میزان هوادهی برروي رشد سلولها اثر گذاشته و مقدار زیاد ان باعث کاهش محصول سبزینه ای میگردد. بطور کلی میزان اکسیژن مورد نیاز سلولهاي گونه ها و لاین های مختلف گیاهی مورد كشت، متفاوت است. در هر صورت براي بهبود و تامين هوادهي كشت هاي محلول ميبايستي انها بين يك تا صد و پنجاه دور در دقيقه تكان داده شوند. بعضي از كشت ها از قبيل كشت كالوس هويج اگر بطور دوره اي در محيط كشت غوطه ور شده و از ان خارج شوند رشدشان بيشتر ميگردد (Staba, 1980). در مقايسه با كشت هاي روي دستگاه لرزان اين غوطه ور شدن دوره اي در اندامهايي مانند دمبرگ هويج باعث تسريع در رشد و ظهور اندامها و جنين هاي رويشي ميگردد. غوطه ور شدن دوره اي اندامها در محيط كشت توسط كشت انها درون لوله هاي تي شكل و يا ستاره اي شكل (ظروف كشت استوارد) و قرار گرفتن انها برروي صفحات عمودي و چرخان دستگاه اكسوفيتون كه با افق زايه بين 10 تا 12 درجه دارند و در دقيقه يك تا دو دور حول محور خود ميچرخند، ميسر ميباشد. در همين رابطه لازم به توضيح است كه مقدار محلولي كه در هر ظرف كشت ريخته ميشود ميبايستي بدقت ازمايش شود تا با انتخاب حجم مناسب محلول نمونه ها در ان بخوبي رشد و نمو نمايند.
بنظر ميرسد كه تنها اكسيژن برروي چگونگي رشد كشت درون شيشه تاثير گذار نيست، بلكه دی اکسید کربن موجود در داخل لوله ازمایش نیز بر روی جنین زایی و اندام زایی موثر ميباشند. بطور مثال افزايش غلظت دی اکسید کربن و اتیلن ميزان رشد بعضی از کشت های سلولی گیاهی مانند كشت سلولهاي گياه تاليكروم روگوزوم (Thalicrum rugosum) را از طریق ممانعت از اثر بازدارندگی هوادهی زیاد و يا جلوگيري از سنتز مواد ثانويه متابولیکی مانند بربرين(Berberine) كه يك نوع الكالوئيد ميباشد، بهبود ميبخشد (Ammirato, 1983b: Kumar et al. 1987, 1989: Kim et al. 1991b : Bisaria and Panda 1991) .
صفحات 106 تا 113 118 تا 121
6-6- نگهداري محيط كشت ماده غذايي
محيط كشت براي مدت زياد را مي توان در حرارت كم (5درجه سانتي گراد ) و در تاريكي نگهداري كرد . در طول نگهداري دراز مدت بايد دقت كافي مبذول شود كه از تبخير زياد آب از محيط كشت ، جلوگيري شود . بنابراين ،توصيه ميشود كه اتوكلاو شده ، در كيسه هاي پلاستيكي از قبل استريل شده و كاملا تميز ، بسته بندي شوند . در صورت امكان بايستي از نگهداري طولاني محيط كشت احتراز نموده ، زيرا بعضي مواد ، مثل IAA در آب ناپايدار هستند .
فصل هفتم
نحوه انسداد درب لوله هاي آزمايش و ظروف
ازيك سو، لازم است كه درب لوله هاي آزمايش و ظروف (فلاسكها)، براي جلوگيري ازخشك شدن و آلودگي ، بسته شوند ، و از سوي ديگر، براي جلوگيري از كم شدن اكسيژن و جلوگيري از جمع شدن دي اكسيد كربن و اتيلن ، بايستي امكان مبادله گازها با خارج ، وجود داشته باشد. بستن درب ، واسطه اي است بين اين دو نياز، وبا وسايل زير ، مي توان آن را انجام داد :
1. گلوله هاي پنبه اي : قبلاً ازگلوله هاي پنبه اي كه با دست ساخته مي شدند، زياد استفاده مي شد. متراكم كردن آنها ، با زحمت زيادي همراه بود ؛ولي اكنون ، ماشينهاي وجود دارند كه قادرند گلوله هاي پنبه اي را متناسب با لوله ها و ظروف ، بسازند. قبلاً گلوله هاي پنبه اي ، پس از انتقال نمونه به محيط كشت ، سوزانده مي شدند ، ولي انجام اين كار براي پنبه هاي مصنوعي كه توليد گازهاي سمي مي كنند ،امكان پذير نيست.
2. در پوشهاي معمولي : اين در پوشها ، سلولزي بوده و داراي خلل و فرج هستند كه مي توان آنها را به داخل لوله آزمايش ، فشار داد .
