آمادهسازی نمونه
برای آمادهسازی نمونه جهت تزریق به دستگاه HPLC ، ابتدا نمونه بهمدت 48 ساعت در آون با دمای 38 درجه سانتیگراد خشک شده و سپس آسیاب شد. 50 میلیگرم از نمونه پودر شده به ارلن مایر 50 میلیلیتری حاوی 5/12 میلیلیتر ترکیب متانول و آب به نسبت 80 به 20 (v/v) اضافه شد سپس30 دقیقه در التراسوند قرار داده شده و پس از آن آب دو بار تقطیر بهنسبت 1:1 به عصاره اضافه گردید (12.5 میلیلیتر آب دو بار تقطیر اضافه شد). محلول حاصله بهمدت 15 دقیقه در دور 5000 تا 6000 سانترفیوژ شد. بخش فوقانی محلول سانترفیوژ شده به ظروف مخصوص HPLC انتقال داده شد و در دمای 18- درجه تا زمان آنالیز نگهداری شدند (شوتز و همکاران 2006).
تهیه نمودار کالیبراسیون برای کلروژنیک اسید و کافئیک اسید
بهمنظور تهیه منحنی کالیبراسیون و معادله خط مربوطه از غلظتهای 500، 250، 100، 50، 20 و 10 میلیگرم بر لیتر کلروژنیک اسید و کافئیک اسید استفاده گردید. به این صورت ابتدا یک محلول پایه از کلروژنیک و کافئیک اسید با غلظت 500 میلیگرم بر لیتر تهیه و سپس حجم معینی از آن را درون بالن ژوژه 10 سیسی، توسط متانول خالص رقیق نموده تا هر یک از غلظتهای فوق حاصل گردد. هر یک از استانداردهای فوق را سه بار به دستگاه تزریق تا از کالیبره بودن دستگاه اطمینان حاصل گردد. سپس با استفاده از مساحت سطح زیر منحنی هر یک از استانداردها نمودار کالبراسیون مربوطه رسم و معادله خط حاصل بهدست آمد.
تزریق نمونه گیاهی
بهمنظور شناسایی پیک مربوط به کلروژنیک و کافئیک اسید در نمونههای تهیه شده، زمان بازداری آن در نمونه با زمان بازداری ترکیب استاندارد در هر تزریق مقایسه شد. برای اطمینان بیشتر نمونهای همراه با استاندارد تزریق و پیک مربوطه دقیقا در زمان پیک استاندارد ظاهر شد.
میزان کلروژنیک اسید و کافئیک اسید بر حسب درصد بیان میشود. X مجهول در فرمول منحنی را با جایگزین کردن سطح زیر نمودار نمونههای تزریق شده بهدست میآوریم . واحد مجهول (x) بر حسب پیپیام میباشد. پیپیام مقدار میلیگرم در 1000 سیسی است که با توجه به اینکه عصاره خشک قبل از تزریق در محلول 1 میلیلیتر متانول حل شده بود، مقدار میلیگرم کلروژنیک و کافئیک اسید در حجم 1 میلیلیتر بهدست میآوریم و سپس به گرم تبدیل کرده و درصد بیان میکنیم.
- << قبلی
- بعدی