5-برشها را بمدت 15 تا30 ثانيه داخل محلول فوشين بازي يا سبزميتل قرار دهيد. دقت كنيد كه از رنگ سبزميتل فقط يك يا دو قطره بريزيد.
6-برشها را با آب بشوئيد.
7-برشها را بمدت 15 تا 30 ثانيه در قهوه اي بيسمارك و يا 15 تا 20 دقيقه در كارمن زاجي قرار دهيد.
8-برشها را براي آخرين بار با آب شسته سپس با تهيه پرپاراسيون در زير ميكروسكپ مشاهده كنيد.
جدول زير راهنماي رنگ ها، زمان رنگ آميزي، نوع بافتها و جنس بافتها، رنگي كه بافت به خود مي گيرد (رنگ آميزي مضاعف) مي باشد.
نوع رنگ آميزي |
نام رنگ |
زمان |
نام و جنس بافت |
رنگ يافت پس از رنگ آميزي |
نوع1 |
كارمن زاجي سبز متيل |
20-15 دقيقه 30-15 ثانيه |
پارانشيم-كلانشيم-آبكش(سلولز) آوندهاي چوبي-اسكرانشيم-چوب پنبه |
صورتي
سبز |
نوع 2 |
كارمن زاجي آبي متيل |
20-15 دقيقه 30-15 ثانيه |
پارانشيم-كلانشيم-آبكش(سلولز) آوندهاي چوبي-اسكرانشيم-چوب پنبه |
صورتي آبی |
نوع3 |
قهوه اي بيسمارك سبز يد |
60-30 ثانيه 30-15 ثانيه |
پارانشيم-كلانشيم-آبكش(سلولز) آوندهاي چوبي-اسكرانشيم-چوب پنبه |
زرد-زرد قهوه اي سبز |
نوع4 |
قهوه اي بيسمارك فوشين بازي |
60-30 ثانيه 30-15 ثانيه |
پارانشيم-كلانشيم-آبكش(سلولز) آؤندهاي چوبي-اسكرانشيم-چوب پنبه |
زرد-زرد قهوه اي قرمز گلی |
مشاهده سلول گياهي و بافت اپيدرم
مواد و وسايل مورد نياز
-پيازخوراكي(Allium cepa)- برگ شمعداني- برگ تره- پنس- لام- لامل- سوزن تشريح
مراحل كار:
1- قطعه اي از اپيدرم پشتي فلس پياز را جدا كرده و روي لام تميز قرار دهيد سپس قطره اي اب روي اپيدرم ريخته و لامل با زاويه 45 درجه در يك لبه قطره آب قرار دهيد و منتظر بمانيد تا آب در لبه لامل پخش شود. سپس با سوزن تشريح لامل را روي قطره بگذاريد و فشار دهيد. اگر حبابهاي هوا وجود دارند، با چند ضربه ملايم آنها را خارج كنيد.
و بعد زير ميكروسكپ سلولهاي اپيدرمي پياز را مشاهده كنيد ضمنا سلول گياه را نيز مورد بررسي قرارداده و اجزاي سلول و ديواره هاي سلولي را تا آنجا كه قابل رويت است مشاهده نمائيد.
2- قطعه اي از اپيدرم تره را جدا كرده و به كمك پنس روي لام بگذاريد دقت كنيد كه پارانشیم كلروفيلي به اپيدرم نچسبد قطره اي آب روي اپيدرم ريخته و بعداز گذاشتن لامل در زير ميكروسكپ مشاهده نمائيد.
3-قطعه اي از اپيدرم تحتاني برگ شمعداني را به كمك پنس جدا كرده و پرپاراسيون تهيه كنيد سپس آنرا زير ميكروسكپ مورد مشاهده قراردهيد.
-شكل سلولهاي اپيدرمي پياز را رسم نموده و اجزاء سلول را نامگذاري كنيد.
-اشكال سلولهاي اپيدرمي تره را نيز پس از مشاهده رسم نموده و نامگذاري كنيد.
-اشكال سلول هاي اپيدرمي شمعداني (Geranium) را رسم نموده و نامگذاري كنيد شكل كركها را نيز پس از مشاهده رسم كنيد.
-فرق بين اپيدرم شمعداني و تره وپياز را بيان كنيد.
-مشاهده بافت چوپ پنبه
-مشاهده بافت پارانشيم ذخيره اي
-مشاهده دانه هاي نشاسته
مواد و وسايل مورد نياز
-سيب زميني- آب ژاول- آب اسيد- آبي متيل- كارمن زاجي يا قهوه اي بيسمارك- تيغ تيز- سوزن تشريح- شيشه ساعت- لام- لامل و محلول يد (معرف نشاسته)
سيب زميني (solanum tubersum)
مراحل كار:
1-برشهاي نازك از پوست سيب زميني و يك مقداري از پارانشيم ذخيره اي چسبيده به چوب پنبه(پوست) را تهيه كنيد.
-برشها را به مدت 15 تا20 دقيقه در آب ژاول قرار داده و پس از شستشو با آب آنها را يك دقيقه در آب اسيد دار نگهداريد و دوباره چند بار با آب شستشو دهيد.
-برشها را 15 تا 30 ثانيه در سبز ميتل يا آبي ميتل قرار داده بلافاصله با آب خوب شستشو دهيد بطوري كه بعداز چند بار شستن رنگي از نمونه ها ضايع نشود.
-برشها را به مدت 15تا 20 دقيقه در كارمن زاجي و يا 30 تا60 ثانيه در قهوه اي بيسمارك بگذاريد بعد آنها را شسته و پرپاراسيون را آماده نمائيد و زيرميكروسكپ بافت چوب پنبه و پارانشيم ذخيره اي را مطالعه كنيد.
-شكل سلولها را در بافت چوب پنبه و پارانشيم ذخيره اي رسم كنيد.
-ديواره سلولي بافت چوب پنبه و پارانشيم ذخيره اي با چه رنگي رنگ مي گيرند.
2-مشاهده دانه نشاسته
از آب سيب زميني به كمك تيغ با اسكالپل برداشته و به روي لام ريخته و يك قطره محلول يد اضافه نمائيد و لامل را روي آن قرار داده زير ميكروسكپ مشاهده كنيد.
-دانه هاي نشاسته با محلول يد به چه رنگي در مي آيد؟
-مشاهده بافت گزيلم و تزئينات چوب در آوند هاي جوبي ساقه كدو
-مشاهده بافت فلوئم يا آبكش در ساقه كدو مسمائيCucurbita-pepo
مواد و وسايل لازم
ساقه كدو- مغز آقطي- آب ژاول- آب اسيد- آبي ميتل- كارمن يا قهوه اي بيسمارك- تيغ نو وتيز- سوزن تشريح- شيشه ساعت- لام- لامل
مراحل كار:
ساقه كدو را طوري در داخل شكاف مغز آقطي يا يونوليت قرار دهيد كه بتوانيد از آن برش طولي تهيه نمائيد و برشهاي نازكي از آن را بريده و در داخل آب ژاول بمدت 10 دقيقه نگهداريد بعد آنها را چند بار با آب مقطر شسته و يك دقيقه در آب اسيد قرار دهيد و دوباره چند بار آنها شستشو دهيد و مراحل ديگر رنگ آميزي مضاعف را با رعايت زمانهاي آنها تا آخر ادامه دهيد و پس از آخرين شستشو چند نمونه را انتخاب كرده و روي لام بگذاريد و با اضافه كردن يك قطره آب لامل را روي آن قرار داده و سپس زير ميكروسكپ مشاهده نمائيد.
-مشاهدات خود را بار رسم شكل و نامگذاري كامل كنيد.
-مشاهده ساختمان اوليه ريشه در ريشه زنبق (تك لپه اي) Iris
-مشاهده ساختمان اوليه ريشه در ريشه آلاله (دو لپه اي علفي)
مواد و وسايل مورد نياز
ريشه آلاله- ريشه زنبق- آب ژاول- آب اسيد- سبز متيل- كارمن يا قهوه اي بيسمارك- تيغ تيز- سوزن تشريح- شيشه ساعت- لام- لامل
مراحل كار:
در مغز آقطي يا يونوليت يك شكاف عمودي ايجاد كرده و ريشه را در شكاف طوري قرار دهيد كه برشهاي عرضي تهيه شود سپس آنها را رنگ آميزي مضاعف كنيد و در نهايت بهترين نمونه را كه كم رنگترين آنها بوده و درته آب مي ماند انتخاب كرده و پر پاراسيون را آماده سازيد و در زير ميكروسكپ ريشه تك لپه اي را مورد مطالعه قرار دهيد.
-شكل قسمتي از برش عرضي ريشه زنبق و آلاله را كه تمامي بافتهاي ريشه را نشان
مي دهد كشيده و نامگذاري كنيد.
-فرق ما بين ريشه زنبق و آلاله را از نظر ساختاري مشخص نمائيد.
مشاهده ساختمان ريشه گياه دو لپه اي چوبي چند ساله
به دليل اينكه تهيه لام براي اينگونه ريشه ها در شرايط آزمايشگاهي كه ميكروتوم وجود ندارد و بافتهاي چوبي موجود در ريشه بوسيله تيغ قابل برش گيري نمي باشند لذا جهت مطالعه اين نوع ريشه ها مي توان از لامهاي آماده و يا ترنس پرنسي هاي موجود بهره برد. براي مثال Tilia sp يا لاله درختي نمونه خوبي براي مطالعه معرفي مي گردد. اين برش نمونه يك ريشه جوان چوبي چند ساله است. زماني كه اين برش كمتر از يكسال سن دارد، از نظر ساختار مشابه ريشه آلاله است. ولي در نمونه هاي چند ساله چوب ثانويه به وسيله كاميپوم آوندي در حلقه هاي سالانه متحدالمركز مشابه ساقه ايجاد شده است. و آبكش ثانويه بيرون چوب ثانويه واقع شده است پس از مشاهده به سوالات زير پاسخ دهيد، ايا اندودرم وجود دارد؟ آيا اپيدرم هنوز كامل است؟ آيا پوست وجود دارد؟
-مشاهده ساختمان ساقه علفي گياه دو لپه اي نعناع(Labiatae)
-مشاهده ساختمان ساقه گياه تك لپه اي جگن(Cyperacea yuncus)
مواد و وسايل مورد نياز و مراحل كار همانند جلسات قبل بوده و فقط زمان نگهداري برشها در آب ژاول براي ساقه نعناع 10-5 دقيقه و براي ساقه جگن20-15 دقيقه مي باشد.
نمونه هاي ميكروسكپي آماده شده را زير ميكروسكپ مورد مشاهده قرار داده و مطالعه نمائيد
-شكل قسمتي از برش را كه گوياي ساختمان ساقه نعناع باشد رسم نموده و نامگذاري كنيد.
-شكل قسمتي از ساقه جگن را نيز كشيده و نامگذاري كنيد.
-ساقه گياه دو لپه اي و تك لپه اي را با هم مقايسه كرده و وجه تمايز آنها را بيان نمائيد.